Влияние изменений в первичной структуре мегаплазмид на социальную подвижность почвенных бактерий Azospirillum brasilense, Кацы Е.И.

Задача — обоснование гипотезы о том, что определенные изменения в структуре мегаплазмид могут приводить к переключениям в продукции двигательных органелл (полярный жгутик /Fla/ или полярный пучок пилей /Bfp/) и социальной подвижности (роение, определяемое вращением Fla и латеральных жгутиков и межклеточными контактами — фенотип Swa+; ускоренное роение — фенотип Swa++; распространение с образованием микроколоний, зависящее от сокращения-вытягивания Bfp и межклеточных взаимодействий — фенотип Gri+) у ассоциированных с растениями почвенных бактерий. Объекты — штамм Azospirillum brasilense Sp245 дикого типа, его оригинальные мутанты и фенотипические варианты с изменениями в образовании О-специфических полисахаридов, двигательных органелл и подвижности. Молекулярные зонды — клонированные фрагменты 85-МДа (p85) и 120-МДа (p120) плазмид Sp245 (для гибридизации и секвенирования ДНК), олигонуклеотидные праймеры (для амплификации ДНК). План работы: Молекулярно-генетическая характеристика отличающихся от родительского штамма ускоренным роением спонтанных вариантов и мутантов Sp245 (несущих вставки вектора в p85) (переход от Swa+ к Swa++ фенотипу). Анализ изменений в первичной структуре p85 и p120 у мутанта Sp245, имеющего ярко выраженный фенотип Gri+, и у Swa++ производных данного мутанта (переходы от Swa+ к Gri+ и от Gri+ к Swa++ фенотипу). Определение нуклеотидной последовательности и характеристика предполагаемых продуктов экспрессии тех локусов p85 и p120, индуцированные или спонтанные перестройки в которых привели к фенотипическим вариациям в социальной подвижности азоспирилл. Исследование возможного модулирующего влияния внешних факторов, в том числе, растения-партнера, на частоту появления субпопуляций A. brasilense с фенотипом Swa+ Gri-; Swa- Gri+ или Swa- Gri-. Разработка праймеров для мониторинга плазмидных перестроек у азоспирилл. ПЦР-фингерпринтинг ДНК фенотипических вариантов A. brasilense.